?

Log in

No account? Create an account
Внезапно вопрос про оптику микроскопов - Добрая фея с топором

> Recent Entries
> Archive
> Friends
> Profile
> My Website

September 19th, 2012


Previous Entry Share Next Entry
07:31 am - Внезапно вопрос про оптику микроскопов
А вот нет ли вдруг у вас кого-то такого умного, кто разбирается в объективах микроскопов?
Интересует такая характеристика - на большом (х100, масло) увеличении
- некоторые объективы картинку фокусируют только "плоско", в одном маленьком слое, а все что не в этом слое, получается размазанное,
- а некоторые объективы дают офигенную объемную картинку. То есть их фокус не сосредоточен на очень тонком слое, и получается эдакое 3D.
Говорю про срез ткани толщиной 5 мкм. Хочу его видеть весь в фокусе, а не ломтиками на 2-3 глубины
Вот я хочу узнать, как первые от вторых отличаются, что там за характеристика дает такой эффект?
Или где спросить.. в гугле не банили, хочу сначала живого. ;)

(65 comments | Leave a comment)

Comments:


[User Picture]
From:bitoniau
Date:September 19th, 2012 11:40 am (UTC)
(Link)
Глубина резкости, DOF (Depth-of-field).
[User Picture]
From:tanchik
Date:September 19th, 2012 11:47 am (UTC)
(Link)
Чем глубже (выше DOF), тем лучше будут разные слои в фокусе вместо одного, да?
Спасибо.
[User Picture]
From:shultz_flory
Date:September 19th, 2012 11:43 am (UTC)
(Link)
Вообще говоря, глубина резкости возрастает при диафрагмировании (замечали, как близорукие люди щурятся?)
[User Picture]
From:tanchik
Date:September 19th, 2012 11:48 am (UTC)
(Link)
Диафрагму вертела. Не, это объектив такой. Сходила на чужой микроскоп со своим слайдом, ничего там не трогала, заглянула а там ах!! теперь страдаю. :)
[User Picture]
From:_slw
Date:September 19th, 2012 11:44 am (UTC)
(Link)
а не темнее ли картинка у второго объектива?
[User Picture]
From:tanchik
Date:September 19th, 2012 11:49 am (UTC)
(Link)
Не знаю, может и темней, но мне пофиг, у меня гистология вся яркая и я и так на минимуме смотрю (флюоресценция).
То есть один и тот же мой слайд смотрится как "унылое гавно, чуток в фокусе а остальное размыто" на нашем объективе и как "вау, 3D, елы-палы, ну все слои сразу в фокусе вот прям с этой маленькой складочкой!!" на чужом.
Теперь хочу как тот чужой. Но надо понять, как. :)

Edited at 2012-09-19 11:51 am (UTC)
[User Picture]
From:garten_besitzer
Date:September 19th, 2012 11:44 am (UTC)
(Link)
Глубина резкости зависит от числовой апертуры объектива. У нас есть микроскоп от Keyence, с длиннофокусным объективом, так у него офигенная глубина резкости. Дорогой, правда.

Edited at 2012-09-19 11:48 am (UTC)
[User Picture]
From:tanchik
Date:September 19th, 2012 11:52 am (UTC)
(Link)
А как именно зависит, апертура больше и значит глубина резкости больше? И глубина резкости - это именно то, когда не один жалкий слой, а вот прям все слои в фокусе, да?
[User Picture]
From:potan
Date:September 19th, 2012 11:57 am (UTC)
(Link)
Глубина резкости возрастает при уменьшении диафрагмы - но тогда требуется большая чувствительность или более яркое освещение.
[User Picture]
From:tanchik
Date:September 19th, 2012 12:28 pm (UTC)
(Link)
Диафрагму крутила во все стороны, толку не было. Ну то есть было, только хуже - резкость была только в центре или во всем поле зрения, но никак не по всем слоям. ;)
[User Picture]
From:v_a_l_e_k
Date:September 19th, 2012 12:11 pm (UTC)
(Link)
Все зависит от типа микроскопа - если он фазово-контрастный или, альтернативно, дифференциальный интерференционно-контрастный (DIC). DIC микроскопы дают псевдо-3д картинку.

http://www.olympusmicro.com/primer/techniques/dic/dicphasecomparison.html

[User Picture]
From:tanchik
Date:September 19th, 2012 12:26 pm (UTC)
(Link)
Он конфокальный люминесцентный и световой тоже. Нет DIC, точно. :)

Edited at 2012-09-19 12:27 pm (UTC)
[User Picture]
From:foliant
Date:September 19th, 2012 12:19 pm (UTC)
(Link)
А у меня горюшко-1 (часть в пятне резкости, часть не резкая) появилась внезапно на почти новом микроскопе. И приходится на Х100 в масле постоянно микровинтом вертеть - при смене поля теряется резкость. Сервис в другом городе, теперь пітаюсь понять что ж єто такое.
[User Picture]
From:tanchik
Date:September 19th, 2012 12:25 pm (UTC)
(Link)
Световой микроскоп, да? Вот говорят тут выше в комментах что надо диафрагму покрутить туда-сюда, может поможет.
А от себя добавлю что еще надо купить набор для чистки оптики (там специальная нежная бумажка или тряпочка и жидкость прыскать на объектив) и почистить. И еще - старые микропятна от масла, случайно засохшие, могут тоже такое давать, надо вымыть объектив с тем, что растворяет данный тип масла (гуглится по названию масла, там есть разница). Я когда все это провела, стало гораздо лучше. И стало понятно, что теперь у меня фокус хороший и четкий и все чисто.. но на одном маленьком слое. :(
[User Picture]
From:gippiator
Date:September 19th, 2012 09:01 pm (UTC)
(Link)
Тань, это я Людмиле отвечаю, если чё )))
Если оптика просветленная (окуляр такое синеватое сияние при взгляде сбоку на него дает) - возможно, нарушена пленка просветления (из-за протирания, скажем, этанолом).
Если резкость теряется при смене поля зрения - м.б. проблема не в оптике, а в препаратоводителе на предметном столике (бывает люфт, который при перемещении препарата смещает его по вертикали).
Ну, и стандартная болячка световых микроскопов - плохо отрегулированная рейка кремальеры. Тогда при отпускании микровинта на большом увеличении изображение начинает "плыть". Решается просто - регулировкой рейки, но для этого надо станину микроскопа разбирать.

Edited at 2012-09-19 09:05 pm (UTC)
[User Picture]
From:shao_s
Date:September 19th, 2012 01:00 pm (UTC)
(Link)
Таня, как ты писала выше, у тебя это конфокальный микроскоп. В механизме такого микроскопа есть т.н. "pinhole plate", как раз и предназначенная для отсекания изображений выше и ниже точки фокуса. Потому, как вариант: посмотри инструкцию к микроскопу, найди, где там эта деталь, вынь, и погляди, что будет без неё.
У меня, в своё время, такие штуки получались.
[User Picture]
From:tanchik
Date:September 19th, 2012 01:08 pm (UTC)
(Link)
Спасибо!! Сегодня поковыряю. :)
[User Picture]
From:ilia_yasny
Date:September 19th, 2012 01:32 pm (UTC)
(Link)
У меня есть контакт специалиста из Zeiss, пересекались на конференции, они делают очень красивые биокартинки: Michael Hakans, mhakans@zeiss.com
[User Picture]
From:tanchik
Date:September 20th, 2012 06:12 am (UTC)
(Link)
Цейс крутые, спасибо.
А он не обидится, что я буду спрашивать его про микроскоп конкурентов? Некруто как-то, наверное?
[User Picture]
From:gleb_a
Date:September 19th, 2012 03:02 pm (UTC)
(Link)
Я не специалист, но слышал, что бывают такие приборы, которые умеют автоматически делать послойное фотографирование образца при разных установках фокуса и затем сводить вместе разные слои. В результате получается картинка с огромной глубиной резкости, это как раз то, что тебе нужно.
[User Picture]
From:shao_s
Date:September 19th, 2012 03:54 pm (UTC)
(Link)
Не приборы. Программы. Например, ImageJ: скачать, установить, заряжать снимки в формате *.tiff.
(no subject) - (Anonymous) - Expand
[User Picture]
From:pogorily
Date:September 19th, 2012 06:25 pm (UTC)
(Link)
Глубина резкости тесно связана со светосилой объектива. Причем связь очень простая, понятная даже из школьной оптики.
Чем меньше светосила - тем больше глубина резкости.
Довольно внятно это объяснено в русской википедии, статья "Глубина резко изображаемого пространства"

Обычно светосилу у микроскопов стараются увеличивать, чтобы получить большую яркость изображения. Если нужна большая глубина резкости - надо использовать соотв. микроскоп. Изображение будет менее ярким, но с большей глубиной резкости.
[User Picture]
From:tanchik
Date:September 20th, 2012 06:16 am (UTC)
(Link)
Почитала википедию и остальное. Спасибо.
На светосилу мне в общем-то плевать, и так все ярко..
[User Picture]
From:sliger
Date:September 19th, 2012 09:02 pm (UTC)
(Link)
Давайте по порядку. На объективе после 100х чего написано? (обычно пишут альфа и цифирь в районе 1) это аппертура. Еще много инфы можно извлечь из названия объектива. Характеристики гуглятся. Если Zeiss, то на их сайте все очень доступно изложено.

Из конфокала не надо доставать пинхол пластину - надо этот пинхол открыть через софтину микроскопа, но это только испортить всё. По уму нужно сделать Z stack. Тобишь отсканировать серию картинок и потом уже в любой подходящей софтинке пересчитать на "extended focus", например, как выше говорили, в ImageJ. большинство конфокалов это делает просто, только надо задать шаг по оси Z .
[User Picture]
From:sliger
Date:September 19th, 2012 09:08 pm (UTC)
(Link)
Напишите, пожалуйста, что на объективах написано - сильно упростит задачу, а пока это немного напоминает гадание на кофейной гуще.

> Go to Top
LiveJournal.com